点击接通在线客服
高效薄层色谱法(三)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-08-03

2、分离数分离数(SN)是指在R1值0~1之间能完全分离的斑点数,可由下式表示。

                             (5-33)

式中,a为Rf=1及Rf=O两种组分的斑点中心的距离,近似为原点至展开剂前沿的距离;W。因此斑点越集中,商目同展距中能分离的斑点数越多,说明板效越高,SN越大,薄层板的容量越大。SN是衡量薄层色谱分离能力的主要技术参数之一。

三、固定相的选择与薄层制备

(一)固定相的选择

薄层色谱对固定相的要求包括:①表面积大,常用内部多孔的颗粒和纤维状固体物质;

②在展开剂中不溶,对展开剂和试样组分不起破坏或分解作用;③具有可逆的吸附性,既能吸附试样组分,又易于解吸;④为便于观察分离结果,最好是白色固体。

为使一组混合物得到很好分离,必须根据被分离化合物的性质(如溶解度、酸碱性、极性等)来选择合适的固定相。分离亲脂性化合物,常选择氧化铝、硅胶、乙酰化纤维素以及聚酰胺;分离亲水性化合物,常选择纤维素、离子交换纤维素、硅藻土、聚酰胺等。对于强极性试样,应使用活性低的吸附剂;对于弱极性试样,则使用活性高的吸附剂。为防止吸附剂与试样组分发生酸碱反应而产生不可逆吸附,吸附剂的酸碱性应与试样保持一致。

绝大多数农药残留2018白菜网址大全均用市售的以硅胶为吸附剂的高效薄层板,也有使用纤维素、氧化铝、聚酰胺、硅藻土薄层板的报道。为了使吸附剂薄层能够牢固地附着于支持体(玻璃板或铝箔片)上以便于操作,一般在吸附剂中加入合适的黏合剂,比如煅石膏黏合剂(表不为G)。市售的预制板中使用的黏合剂还有聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸酯等高聚物。

有些农药化合物不吸收可见光,且紫外光下不显荧光,在没有特殊显色剂使之呈现斑点位置的情况下,一般使用带有荧光指示剂的预制板(表示为F254)。整个薄层在紫外灯下呈现荧光,目标农药斑点处的荧光被猝灭而呈暗色,这种荧光猝灭技术的应用便于农药的检出、定位以及定性定量2018白菜网址大全。

目前,改性硅胶越来越多地应用于农药残留2018白菜网址大全之中,所谓改性硅胶就是借化学反应的方法,将有机分子以共价键连接在硅胶的硅醇基上。按键合有机硅烷的官能团分为极性键合相和非极性键合相。极性键合相硅胶和普通硅胶相比,吸附活性较低,常见的极性键合相有氰基、二醇基、氨基等,一般用于正相色谱,用非极性或极性小的展开剂。非极性键合相硅胶又称反相键合相,键合相表面都是极性很小的烃基,如十八烷基、辛烷基、乙基等,一般用于反相色谱,大多以强极性溶剂或无机盐的缓冲液为展开剂。

(二)薄层的制备

目前已有不同规格和类型的预制薄层板出售。预制板的载板一般用玻璃板、铝箔等,使用的固定相品种较多,如硅胶、氧化铝、纤维素、聚酰胺等。高效预制薄层板有氨基键合硅胶预制板、氰基键合硅胶预制板、聚酰胺预制板、混合预制板等。这些预制板规格很多,如不同厚度、不同尺寸、不同包装、是否带有荧光指示剂等。预制薄层板不仅使用方便,而且薄层涂布均匀、光滑、质量高并且具有很好的牢度,因此在分离的效果以及定量2018白菜网址大全重现性等方面较手工制的薄层好,已受到越来越多实验室的青睐。

由于进口预制板的价格较贵,而且在实际工作中有时需要制备一些特殊性能的薄层,因此手工制板应用仍较为普遍。

手工制板一般用5cm×20cm、lOcm×20cm、20cm×20Cm的2mm厚的玻璃板作为载体,要求板面平整,洗净后静置晾干备用。用手动或自动涂布器(如CAMAG自动薄层铺板器,图5—47)将已调制好的固定相均匀地涂铺在玻璃板上即可。

(三)薄层的活化

吸附剂的吸附能力用活度来表示,其吸附力随含水量增加而减弱,这是由于含水量多的硅胶中大部分羟基与水分子先形成氢键,从而减少对被分离物质的吸附。硅胶及氧化铝的活度分级及其活度与含水量的关系见表5~18。

由于吸附剂表面能可逆地吸收水分,因此薄层活度的大小受大气相对湿度的影响。如果大气湿度过大,薄层活度过低,影响分离效果时,则必须将薄层板在点样前根据活度要求在一定温度下活化。薄层活度并非越大越好,一般室温晾干后的薄层在105~120℃干燥0.5~1 h即可达到常规要求的Ⅱ~Ⅲ级活度。但是活化后的薄层板在点样过程中,在短短的几分钟内就可与环境中的相对湿度达到平衡,因此能在恒温恒湿的条件下进行吸附薄层分离是最理想的。

(四)薄层板的预处理

薄层吸附剂不仅可以吸附水分,也能吸附实验室空气中的其他挥发性气体,在展开后的溶剂前沿经常出现明显的污染带。在进行薄层荧光扫描定量2018白菜网址大全时,一些预制硅胶薄层板背景上的荧光杂质必须经过预处理,否则会影响测定灵敏度及线性范围。薄层板预处理的常用方法是用异丙醇或氯仿一甲醇(1∶1)或用与后来色谱分离时所用的展开剂相同的展开剂先展开一次空白薄层板,展距要长于展开时的溶剂前沿。预处理的薄层板在110℃干燥0.5~1h,再在干燥器中放置备用,以免被空气中的污染物重新附着在薄层上。

参考资料:农药残留2018白菜网址大全

相关链接:

高效薄层色谱法(一)

高效薄层色谱法(二)


【关键词】薄层色谱法,高效薄层色谱法,农药残留国家标准物质网 

<< 上一篇:热2018白菜网址大全技术的原理及应用(二)

>> 下一篇:杂交信号检测和结果运算(一)