点击接通在线客服
放射免疫技术在食品检测中的应用(一)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-05

放射免疫2018白菜网址大全(RadioImmunoassay,RIA)是以放射性核素为标记物的标记免疫2018白菜网址大全法,是由Yalow和Berson于1960年创建的标记免疫2018白菜网址大全技术。由于标记物放射性核素的检测灵敏性,本法的灵敏度高达ng甚至pg水平。测定的准确性良好,ng量的回收率接近100%。本法特别适用于微量蛋白质、激素和多肽的精确定量测定,是定量2018白菜网址大全方面的一次重大突破,于1977年荣获诺贝尔生物学医学奖。

一、基本原理

放射免疫2018白菜网址大全的基本原理是标记抗原Ag*和非标记抗原Ag对特异性抗体Ab的竞争结合反应。它的反应式为:

在这一反应系统中,作为试剂的标记抗原和抗体的量是固定的。抗体的量一般取用能结合40%~50%的标记抗原,而受检标本中的非标记抗原是变化的。根据标本中抗原量的不同,得到不同的反应结果。

假设受检标本中不含抗原时的反应为:

在标本中存在抗原时的反应为:

当标记抗原、非标记抗原和特异性抗体三者同时存在于一个反应系统时,由于标记抗原和非标记抗原对特异性抗体具有相同的结合力,因此两者相互竞争结合特异性抗体。由于标记抗原与特异性抗体的量是固定的,故标记抗原抗体复合物形成的量就随着非标记抗原的量而改变。非标记抗原量增加,相应地结合较多的抗体,从而抑制标记抗原对抗体的结合,使标记抗原抗体复合物相应减少,游离的标记抗原相应增加,亦即抗原抗体复合物中的放射性强度与受检标本中抗原的浓度呈反比(见图14—6)。若将抗原抗体复合物与游离标记抗原分开,分别测定其放射性强度,就可算出结合态的标记抗原(B)与游离态的标记抗原(F)的比值(B/F),或算出其结合率[B/(B+F)],这与标本中的抗量呈函数关系。用一系列不同剂量的标准抗原进行反应,计算相应的B/F,可以绘制出一条剂量反应曲线(见图14—7)。受检标本在同样条件下进行测定,计算B/F值,即可在剂量反应曲线上查出标本中抗原的含量。

二、放射免疫测定技术的种类

放射免疫测定法可分两大类,即液相放射免疫测定和固相放射免疫测定。液相放射免疫测定需要加入分离剂,将标记抗原抗体复合物B和游离标记抗原F分离,而固相放射免疫测定测试程序简单,通常无需离心操作。即使没有经过严格训练的工作人员,在采用固相分离方法进行测定时,也很少产生分离误差。因此,SPRIA是体外放射免疫发展的主要方向。液相放射免疫测定的基本过程为:①适当处理待测样品;②按一定要求加样,使待测抗原与标记抗原竞相与抗体结合或顺序结合;③反应平衡后,加入分离剂,将B和F分开;④分别测定B和F的脉冲数;⑤计算B/f、B%等值;⑥在标准曲线上查出待测抗原的量。固相放射免疫测定是将抗体吸附在固相载体上分竞争性和非竞争性。竞争性又分为单层竞争法、多层竞争法,非竞争性又分为单层非竞争法和多层非竞争法。

(一)单层竞争法

预先将抗体连接在载体上,加入标记抗原(*Ag)和待检抗原(Ag)时,二者竞争与固相载体结合。若固相抗体和*Ag的量不变,则加入Ag的量越多,B/F值或B%越小。根据这种函数关系,则可作出标准曲线。

(二)双层竞争法

先将抗原与载体结合,然后加入抗体与抗原结合,载体上的放射量与待测浓度成反比。此法较繁杂,有时重复性差。

参考资料:现代食品检测技术


【关键词】放射免疫,放射性核素,食品检测国家标准物质网 

<< 上一篇:感官检测常用方法(一)

>> 下一篇:紫外-可见分光光度法之定性与定量2018白菜网址大全(三)