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紫外-可见分光光度法之定性与定量2018白菜网址大全(三)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-05

(一)紫外分光光度法定量2018白菜网址大全

采用紫外分光光度法进行定量2018白菜网址大全时,除另有规定外,应以配制样品溶液的同批溶剂为空白对照,采用lcm的石英吸收池,在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸光度,以核对样品的吸收峰波长位置是否正确。除另有规定外,吸收峰波长应在样品规定波长±1nm以内,并以吸光度最大的波长作为测定波长。狭缝宽度的选择,应以减少狭缝宽度时样品的吸光度不再增加为准,或调节狭缝由小到大,直到样品吸光度不变为止。用于含量测定的方法一般有以下几种。

(1)吸收系数法:吸收系数是物质的物理常数,只要测定条件(溶液的浓度、酸度、单色光纯度等)不引起对比尔定律的偏离,即可根据测得的样品吸光度,求出浓度。

                       (8-5)

式中:c——样品的浓度

        A——吸光度

       EE1%1cm——吸收系数(可由文献查出)

(2)标准曲线法:不是任何情况都可以用百分吸收系数E1%1cm来计算样品溶液浓度的,特别是在单色光不纯的情况下,吸光度的值会随所用仪器的不同而在一个相当大的幅度内变化不定,若仍用吸收系数来换算浓度,则将产生很大误差。但对于任一台工作正常的紫外分光光度计,固定其工作状态和测定条件,则浓度与吸光度之间的关系,在很多情况下仍然是直线关系或近似于直线的关系。即:

                          (8-6)

此时,K不是物质的常数,不能用作定性依据,K值只是个别具体条件下的相对常数,不能互相通用。测定时,将一系列(5~10个)不同浓度的标准溶液在同一条件下测定吸光度,观察浓度与吸光度成直线关系的范围,然后以吸光度为纵坐标,浓度为横坐标,绘制A-c曲线,称为标准曲线。也可用直线回归的方法,求出回归直线方程,再根据样品溶液所测得的吸光度从标准曲线来计算浓度。在仪器和方法固定的条件下,标准曲线或回归方程可多次使用。标准曲线法由于对仪器的要求不高,是分光光度法中最常用的简便易行的方法。

(3)直接比较法该法是在相同条件下配制样品溶液和对照品(可以是标准品,也可以是浓度已知的对照样品)溶液,在所选波长处同时测定吸光度A样品及A标品,按式(8—7)计算样品溶液的浓度:

                       (8-7)

该法的测定误差比标准曲线法要大些,为了减少误差,应将样品溶液浓度与对照品溶液浓度配制得较为接近。

(二)可见分光光度法定量2018白菜网址大全

样品必须是有色溶液,其测定波长在可见光区。可见分光光度法具有高灵敏度,它的选择性也较高,常能在几种物质共同存在的情况下,无需分离或只作简单的处理,就可测定其中某种组分的含量,因而在定量2018白菜网址大全中得到广泛的应用。

1、测定法

对于部分化合物可利用其本身的颜色(如色素等),在其最大吸收波长处,直接测定吸光度,计算含量。在大多数情况下,是加入显色剂使反应生成有色物质,再进行测定。可见分光法的测定同紫外分光光度法。

2、影响定量2018白菜网址大全结果的因素

影响定量2018白菜网址大全结果的因素有四种,其中主要包括非单色光、溶液浓度、吸收值的范围、与显色反应有关的因素等。前三种已在前文讨论,在此主要讨论与显色反应有关的因素。

(1)显色剂浓度的影响:待测组分与显色剂作用,生成有色化合物的反应通常是可逆的,因此为了使待测组分尽量转变成有色化合物,应当增加显色剂的浓度。当有色化合物的稳定性较大时,显色剂只要稍许过量就足够了;如果有色化合物的离解度较大,则显色剂用量必须得多一些。但需注意,并不是显色剂用量越多越好,有时由于加入过多的显色剂而生成另一种化合物,偏离光的吸收定律,从而影响测定。此外,显色剂过多(特别是有色的显色剂)常使空白增高,灵敏度降低,而且还可能与样品中的干扰物作用,影响测定。因此,显色剂加入过多也是不适宜的,显色剂的加入量必须是适当过量、定量。

适宜的试剂加入量是通过实验确定的。建立一个新的方法必须做条件试验,即保持待测组分浓度和其他条件不变,加入不同量的显色剂,测定其吸光度A并作图。如图8—10所示,开始随着显色剂浓度的增加,吸光度不断增加,当显色剂浓度增加到一定值时,吸光度不再增加,出现平坦部分,这意味着试剂用量已足够了,试剂用量应选择在吸光度不再变化的平坦部分内。

(2)酸度的影响:酸度对待测组分状态、显色剂及显色反应都有影响,分别讨论如下。

①对溶液中待测组分状态的影响:以金属离子为例,大多数高价金属离子如Fe3+、A13+、Th4+、Zr44+在pH较高时,会产生碱式盐或氢氧化物,影响分光光度测定。因此,为了避免这类离子与显色剂形成的有色配合物的水解,常需保持一定的酸度。用铝试剂测定用Al3+时,就是采用乙酸和乙酸钠缓冲溶液来控制pH为5左右,以避免当pH高时,逐级水解生成Al(OH)2+、[Al(OH)2]、Al(OH)3以及AlO2-等而影响测定。

②对显色剂本身颜色的影响:不少有机显色剂带有酸碱指示剂的性质,故在不同酸度下有不同的颜色,使测定得不到正确的结果。例如用二甲酚橙来测定铅的含量,二甲酚橙在pH<6.3时为黄色,pH>6.3时为红色,而铅与二甲酚橙配合物的颜色也是红色,因此必须在pH<6.3的酸性条件下测定。

参考资料:现代食品检测技术

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【关键词】紫外-可见分光光度法,食品检测,定性,定量,国家标准物质网 

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