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紫外-可见分光光度法之定性与定量2018白菜网址大全(四)
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-06

③对显色剂反应的影响:许多有机显色剂本身为弱酸,如磺基水杨酸、铝试剂、二甲酚橙、双硫腙等,它们在水溶液中存在弱酸的电离平衡,当氢离子浓度增大时,显色剂离子浓度要减少,从而会影响与待测组分的显色反应。此外,在待测组分与显色剂的量保持不变,当溶液的pH不同时,可以形成具有不同配位数、不同颜色的逐级配合物。如Fe3+与磺基水杨酸(以B表示)作用,在pH为1.8~2.5时,生成紫红色的[Fe(B)]+;当pH为4.O一8.0时,生成橙红色的[Fe(B)2];当pH为8.0~11.5时,生成黄色[Fe(B)3]3-;pH>12时,有色配合物被破坏,生成Fe(OH)3沉淀。可见,必须控制溶液的pH,才能得到组成稳定的配合物,以保证获得正确的测定结果。

pH对显色反应的影响是多方面的,也是很复杂的,所以最适宜的pH范围还是需通过条件试验加以确定。

(3)温度的影响:一般显色反应均在室温下完成,但有些显色反应在室温下反应很慢,需要在较高温度下进行。例如用硅钼蓝法测定硅时,在室温(15~300C)下形成硅钼黄需要15—30min,而在沸水浴中只要30s即可完成。相反,有些反应需要在低温下进行,例如用对氨基苯磺酸和α-萘胺测定亚硝酸盐时,温度不能太高,不然重氮化合物会分解而影响分光光度测定。当温度改变时,某些有色化合物的吸光系数会发生改变,因此待测溶液和标准溶液应尽可能在相同的温度下进行测定。

(4)时间的影响:有的显色反应可以很快进行完全,即在显色后可立即测定其吸光度;有的显色反应进行较慢,需经过一段时间才能达到稳定的吸光度;在有些情况下,吸光度达到一定值后又慢慢降低、所以在建立一个新的方法时,应先作条件试验,确定吸光度保持稳定不变的时问范围。

(5)共存组分的影响:共存的干扰组分本身有色,或能与显色剂生成有色化合物,或能与待测组分起反应,均会影响分光光度法的准确测定。减少或消除共存组分干扰的方法有以下几种。

①尽可能采用选择性高的试剂:例如丁二酮肟与Ni2+能生成鲜红色的配合物,该反应的选择性较高,其他离子的干扰很少,故广泛用于镍的比色测定。

②控制酸度法:例如用磺基水杨酸法测定铁,在碱性溶液中Cu2+、Al3+、Mn2+有干扰,但当pH为2~3时,就可在它们的共存下测定铁。

③配位掩蔽法:加入配位掩蔽剂,使与干扰离子反应而避免干扰。例如用双硫腙测铅时,铁、铝、铜、锌等离子也与双硫腙生成配合物,而引起干扰。但加入柠檬酸盐及氰化钾等配位掩蔽剂后,就能避免干扰。因为柠檬酸盐能配位铁、铝等离子;氰化钾能与铜、锌等生成稳定的配合物,不影响对铅的测定。

④氧化还原法:加入氧化剂或还原剂,改变干扰离子的价态而消除干扰。例如测定钼时,利用Mo5+与SCN-反应生成橘红色的Mo(SCN)5,进行比色定量,当有Fe3+存在时,也能与SCN生成红色物质而产生干扰。如果加入还原剂氯化亚锡或抗坏血酸,使Fe3+还原为Fe2+,就可以消除干扰。

⑤选择适当的测定波长以消除干扰:例如用分光光度法测定MnO4-,当有Cr202-7存在时,Cr202-7与MnO4-的吸收光谱在525 nm波长有部分重叠,如图8—11所示。如在525nm波长处,Cr202-7会干扰MnO4-的测定,故选择545nm波长,便可消除Cr202-7的干扰。

⑥选择适当的空白溶液以消除干扰:空白溶液的作用及选择的一般原则已在前文讨论过,在此仅介绍几种常用空白溶液。

A、溶剂空白:当溶液中只有待测化合物在测定波长下有吸收,试剂(包括显色剂)和样品中其他成分均无吸收时,可用溶剂作空白溶液,简称溶剂空白。

B、试剂空白:如果除被测组分外只有显色剂在测定波长下对光有吸收,而其他均没有或吸收很小时,可按照与显色反应相同的条件(不加样品),同样加入各种试剂和溶剂作为空白溶液,称为试剂空白。

C、平行操作空白:用不含待测组分的样品,按照与样品2018白菜网址大全相同的条件与样品平行操作,称为平行操作空白。这种空白常被当作一个样品来处理,2018白菜网址大全结果应从样品值中减去该空白值。

D、样品空白:按照与显色反应相同的条件,取同样量的样品溶液,但不加显色剂,这种空白溶液称为样品空白。适于样品有底色,而显色剂无色的情况。

此外,还有改变试剂加入的顺序使显色反应不发生的不显色空白,以及加入褪色剂以破坏待测组分的有色配合物的褪色空白等。

五、计算分光光度法的简介

在分光光度2018白菜网址大全法中,对于吸收曲线严重重叠的多组分的测定,一般是将组分分离后逐个进行测定,这样既耗费试剂和时间,又增大了工作强度。近年来因计算数学的发展及计算机应用的普及而迅速发展起来的计算分光光度法,则是一种不经分离同时决速测定多组分体系的新方法。

参考资料:现代食品检测技术

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