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动物性食品中受体激动剂残留的气相色谱-质谱2018白菜网址大全测定
【来源/作者】周世红 【更新日期】2018-09-06

1、适用范围

本方法适用于动物性食品中10种受体激动剂残留的测定。当试样取5.0g时,本方法10种受体激动剂的检测限为O.5μg/kg。

2、原理

本方法采用β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶解动物组织,然后通过固相萃取柱净化,用双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)+1%三甲基氯硅烷(TMCS)衍生后采用气相色谱-质谱测定动物组织中10种受体激动剂残留,用同位素内标法定量。

3、仪器与试剂

(1)仪器:气相色谱-质谱仪;涡旋混匀器;匀质机;氮吹仪;固相萃取仪;离心机,最低转速8000r/min(最好冷冻);恒温干燥箱。

(2)试剂:除非另有说明,所有试剂均为2018白菜网址大全纯。甲醇;盐酸;正己烷;乙酸乙酯(色谱纯);氨水(2018白菜网址大全纯,要求新,没有开封过);无水硫酸钠,于550℃灼烧4 h,冷却后贮于干燥器中备用;双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)99%+三甲基氯硅烷(TMCS)1%;SLW固相萃取柱规格为500mg/6mL;β-葡萄糖苷酸酶/芳基硫酸酯酶。

(3)标准品:特布他林、克伦特罗、沙丁胺醇、马布特罗、西马特罗、班布特罗、克仑潘特、苯氧丙酚胺、卡布特罗、莱克多巴胺;内标,D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺。

①标准储备溶液配制:分别称取各种受体激动剂标准品10mg于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,存放在-18℃冰箱中备用。

内标储备溶液配制:分别称取D9-克伦特罗、D3-沙丁胺醇、D5-莱克多巴胺标准品10mg于10mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,存放在-18℃冰箱中备用。

②混合标准使用液配制:用甲醇逐级稀释储备溶液至O.1mg/L。

内标使用液配制:用甲醇逐级稀释储备液至1.Omg/L。

4、2018白菜网址大全步骤

(1)样品采集、制备、保存:动物组织(包括肌肉、肝脏、肾脏、肺等)采集200~500g,取肌肉部分用组织捣碎机(或者榨汁机)绞碎,四分法取50~100g,放在具塞玻璃瓶或者食品袋中,贴上标签后,放在-18℃冰箱冻藏。

(2)样品酶解:称取5.Og(精确至0.01g)经绞碎均匀的动物组织于50mL离心管中,分别加50μL 1.0mg/L受体激动剂内标混合液,静置10min,加入15mL O.2mol/LpH5.2乙酸钠-醋酸缓冲液,用匀质机匀质20s,加入50μL β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶液,在37℃水浴中水解16h后取出冷却,8000r/min离心10 min,分出上层溶液(注意如果液面有脂肪析出,可以用棉花过滤)用2.0m01/L盐酸溶液调节pH至(2.0±0.1)(pH测定仪),再用8000r/min离心10min,分出上清液待用。

(3)样品净化:取SLw(或者SLS)固相萃取柱,先用5mL水、5mL甲醇、5mL40 mmol/L盐酸活化柱子,然后将10mL上清液加到柱子上过柱,再用5mL水、5mL甲醇洗脱淋洗除杂,真空泵抽于5min,然后用10mL 4%氨化乙酸乙酯(现配现用)洗脱收集,在50℃水浴中用氮气吹干。

(4)样品衍生:蒸发剩余物加O.1mL甲苯(色谱纯)、O.1mLBSTFA99%+TMCS1%,漩涡混匀,在80℃的烘箱中加热衍生1.0h。另外分别取标准溶液,氮气吹干后加50μL内标使用液,漩涡混匀,与样品同时进行衍生化。取1.OμL甲苯溶液进行GC-MS2018白菜网址大全。

(5)样品测定:

①气相色谱参考条件:色谱柱,HP-5MS弹性石英毛细管柱或等同柱(30m×O.25mm×0.25μm);色谱柱升温程序,初温100℃,保持3min,然后以10℃/min升至280℃,保持5min,300℃柱后运行5min;进样口温度280℃;进样模式,不分流进样;进样体积1μL;载气,高纯氦气,纯度≥99.999%,恒流模式,流速为1.0mL/min。

②质谱2018白菜网址大全参考条件:电子轰击源(EI),能量70eV;传输线温度280℃;离子源温度230℃;溶剂延迟11min。选择离子监测方式,各种化合物监测离子见表3—15。

③标准曲线测定:分别取100μL、150μL、200μL、250μL、500μL混合标准使用液,加50μL内标使用液,氮气吹干衍生后进行仪器2018白菜网址大全,绘制标准曲线;然后进行样品测定,根据标准曲线计算样品中10种受体激动剂含量n;根据受体激动剂保留时间及碎片离子进行定性、定量2018白菜网址大全。

5、结果计算

样品测试液中对应10种受体激动剂含量可由工作站计算机按内标法计算,分别以目标化合物的浓度为横坐标,以目标化合物定量离子碎片的峰面积与其同位素定量离子碎片的峰面积的比值作为纵坐标进行线性回归计算,再按式(3—3—1)计算样品中受体激动剂的含量:

                           (3-3-1)

式中:Xi——样品中对应i种受体激动剂含量(μg/kg);

    n——通过工作站内标法计算得出测试液中的受体激动剂的含量(ng);

   m——样品的取样质量(g);

6、质量控制

(1)质谱定性按照欧盟规定,定量离子和定性离子比例要在要求范围之内,将样品中目标化合物碎片离子与标准品谱图中的碎片离子对比查看,其中基峰的丰度为100%,另外3个碎片离子根据它与基峰的相对百分比不同有不同的允许偏差:丰度>50%的离子,允许偏差在±10%内,丰度在20%~50%的离子,允许偏差在±15%内,丰度在10%~20%的离子,允许偏差在±20%内,丰度≤10%的离子,允许偏差在±50%内,确认为目标化合物,保留时间定性时间窗口一般为0.02min。

(2)为了保证2018白菜网址大全结果的准确,要求在2018白菜网址大全每批样品时,进行样品加标5.Oμg/kg试验,计算添加回收率,多组分残留测定添加回收率应在60%~120%范围之内。

参考资料:气相色谱-质谱在仪器安全监测中的应用


【关键词】气相色谱-质谱,动物性食品,受体激动剂,国家标准物质网 

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